DNA RNA の受託合成
バイオ研究を支援する

siRNA アニーリング法

　※実験には RNase free の水 および バッファーを使用してください。
　※RNase の混入を避けるため、チップ及びチューブは、RNaseFreeの新品チップ及びチューブを使用してください。

　１．RNAサンプルをそれぞれ RNase free の水で 50 μM（50 pmol/μL）に希釈してください。
　　　乾固した RNA は、DNAと違って水に溶けにくい性質があります。ボルテックスミキサーや超音波洗浄機を使用して、
　　　十分に溶解してください。
　　　※RNase-free の条件であれば、溶解は室温でも構いませんが、RNaseの混入の恐れがある場合は、チューブを氷上で
　　　　冷却しながら溶解してください。（温めると、分解の恐れが高くなります）
　　　※カラム精製品には、カラムから脱落した浮遊物が混入してしまう場合があります。軽く遠心して、白い浮遊物を取り除いて
　　　　ご使用ください。
　　　※実験に使用する前日に一度凍結し、当日融解することによって溶けやすくなる場合があります。

　２．RNAサンプル (各30 μL）と 5×annealing buffer*(15 μL）を混合してください。（Total 75 μL）
　　　※残ったRNAは、長期間使用しない場合、小分けにして乾燥し、-80℃で保存してください。
　　　　（１〜２週間以内に使用する場合は、溶液のまま -20℃で保存してください。）

　３．２の混合溶液を 90 ℃ で 1分間加熱し、スピンダウン後に 37℃ で 60分間静置してください。
　　　オリゴは２本鎖になり、最終濃度は 20 μM（20 pmol/μL）になります。
　　　溶液は -20℃ で保存してください。また、アニーリング後の凍結融解は 5回以内にしてください。


（参考）siRNA user guide

　※5×annealing buffer* (500 mM potassium acetate, 150 mM HEPES-KOH pH 7.4, 10 mM magnesium acetate)
　　の調製方法

　　水 (25mL)、1M potassium acetate (50 mL)、1M HEPES-KOH pH7.4 (15 mL)、100mM magnesium acetate (10 mL)
　　を蓋付きビン中で混合し、DEPC (100 μL)を加えて スターラーでよく混合後、オートクレーブ処理（121 ℃、20分）により、
　　DEPCを不活化して使用してください。
　　※DEPCは有毒で揮発性が高いので、混合中はしっかり蓋をし、オートクレーブ処理の際は蓋をゆるめてください。